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            液氮罐超低溫保存方法概述

            時間:2023-08-11 11:45來源: 作者:ydgmve2020yyx 點擊:
            微生物可以低溫儲存,低溫儲存方法在應用領域有廣泛的微生物儲存方法。營養混亂的微生物種,如其他儲存方法不能堅持其活力(如植物病原細菌),一般可以低溫儲存(ATCC1983);Halliday,

              微生物可以低溫儲存,低溫儲存方法在應用領域有廣泛的微生物儲存方法。營養混亂的微生物種,如其他儲存方法不能堅持其活力(如植物病原細菌),一般可以低溫儲存(ATCC1983);Halliday,Baker1985)。

              這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鐘)冷藏小管或安瓿中的細胞,直到-150℃,然后將這些小管保存在-150℃~-在196℃的液氮中。低溫冷凍保護劑不同于凍干法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是一種常見的ATCC、由二甲亞砜(5%)和培養液制成的混合物儲存在大多數細胞株中。

              這種化學物質進入細胞可以防止內膜的冷藏損傷。保存在低溫容器中的細胞在恢復時必須小心操作。當小管被加熱時,霜凍會殺死細胞,適當的操作可以防止這種事故。只要靈巧地冷凍和清潔試驗產品,就可以減少活力的丟失。方法是將密封的小管靈巧地放入37℃的水中,直到所有的冰都溶解,然后打開支管,將內容物轉移到培養液中。低溫儲存的微生物必須始終保存在非常低的溫度環境中,因此需要液氮罐。在長期儲存的過程中,必須經常注意填充液氮。

              這種儲存方法比凍干法需要更多的資金,包括保持儲存溫度所需的勞動力和液氮。

              病毒低溫儲存所需材料有:熱收縮塑料管(NuncCryoflex),液氮罐、防割手套和面具、記號筆、汽體噴燈、液氮保溫瓶。

              2方法

              (1)切一段兩側各超過冷凍管長度2cm的熱收縮塑料管。干式液氮罐

              (2)冰浴幾分鐘(分配培養的上清培養液,或分配培養液中的細胞溶解物),用殺菌移液管將0.2ml冰浴的上清懸液分配到冷凍管中,擰緊外蓋。

              (3)將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中間,刺入適當的標簽。

              (4)用噴燈小心加熱熱收縮塑料管,并將其包裹在冷凍管中。切記不要用過高的溫度加熱熱收縮塑料管。

              (5)小心加熱熱縮塑料管兩側,用大鑷子夾住管端口,直至完全密封。

              (6)將密封好的冷凍管迅速冷藏在配有液氮的保溫瓶中(操作時需要戴口罩和手套)。

              (7)將冷藏的冷凍管放入液氮罐的方格中,記錄樣品的具體儲存方向、實驗序列號和儲存日期。

              (8)需要時間,靈巧地從液氮罐中取下試品,放入37℃水浴箱冷凍后,用解剖刀頭將熱收縮塑料管切割在冷凍管的硅化墊圈處。擰開冷凍管外蓋時,不要求去除熱收縮塑料管。

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